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高效液相色谱法常出现的故障及解决的方法
因: 柱温波动。解决方法:控制好柱子和流动相的温度,检查是否有打开的 窗户或空调对着柱温箱。流通池被污染或有气体。解决方法:用甲醇或其他 强极性溶剂冲洗流通池(最好断开柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用 盐酸)。紫外灯能量不足。
液相色谱仪常见的故障包括压力波动大、流量不稳定等问题,其解决方法如下:压力波动大时,需检查流动相中是否有空气,以及单向阀的密封情况。如发现问题,可以拆下单向阀,用丙酮清洗。自检时出现“灯能量低”的错误,首先检查光度室内是否堵塞,氘灯是否点亮,若不亮则更换氘灯,并注意型号。
其他少见的情况包括灯的能量不足,表现为响应值逐渐降低。解决办法是更换灯。然而,这种情况较为罕见,且通常仪器开机时会进行自检,自检通过后一般不会立即出现重现性问题。总之,重现性问题需要细致分析和排查,确保样品处理、仪器条件和环境因素均处于最佳状态。
首先,可能是存在漏点。可以通过以1ml/min的流速开启泵并进行一段时间的运行,然后仔细检查是否存在漏点。其次,流动相的选择也至关重要,如果使用了粘度过低的流动相,如高浓度的正己烷,泵可能会难以将它抽上来。
应在每次使用后冲洗30分钟以上。检测器维护方面,异常峰和噪声可能由光源灯老化或流动相污染引起,可通过更换光源灯或清洗流动池解决。流动池内气泡可通过泵送液和手指紧压流动池出口连接管的方法去除。基线漂移可能由样品池、参比池污染或色谱柱污染引起,需使用溶剂清洗检测池或更换出口连接管。
气泡问题的解决 当液相色谱仪中出现气泡时,可以采取以下步骤进行处理。首先,观察气泡产生的位置。如果是在泵前,可以通过拧开排气阀来清除气泡。如果是仪器管路中,需要卸下色谱柱,使用异丙醇低流速冲洗过夜。
用高效液相测定样品时,怎么做这个样品的检测限,检测限与能检测出来的...
在样品中能检出的被测组分的最低浓度(量)称为检测限,即产生信号(峰高)为基线噪音标准差k倍时的样品浓度,一般为信噪比(S/N)2:1或3:1时的浓度,对其测定的准确度和精密度没有确定的要求。目前,一般将检测限定义为信噪比(S/N)3:1时的浓度。
检测限(limit of detection, LOD)是指在样品中能检出的被测组分的最低浓度,通常定义为信噪比(S/N)为3:1时的浓度。这一定义在实际应用中,意味着在样品分析过程中,信号强度达到噪声水平的3倍时,即可认为检出该组分。
检出限,简单来说,即高效液相色谱能够检测出样品的最小浓度。信噪比3:1的概念是指,样品峰的峰高应为噪音峰的三倍。噪音峰的确定方式是选择基线较为平缓的一段,放大后记录其高度。接着,需稀释样品,直至样品峰高约为噪音峰高的三倍,此时的浓度即为检出限。
然后是将你需要测定的样品进样分析,当信噪比为10的时候,这个浓度就是定量限;当信噪比为3的时候,这个浓度就是检测限。信噪比的意思就是信号/噪音。比如说,你的噪音高度大约是0.1mV,那么检测限就是你的待测样品逐级稀释至 样品峰高为0.3mV时样品的浓度,定量限则是峰高为0mV时的样品浓度。
的时候的样品浓度。定量限 流动相中样品组分在检测器上产生十倍基线噪声信号时相当的浓度或质量流量定为HPLC法的定量限,也就是信噪比为10:1的时候的样品浓度。测定检出限和定量限的所用的方法,就是把样品稀释成一系列浓度梯度,注入HPLC仪中,测定信噪比,在色谱图上直接测定就可以了。
高效液相色谱仪标准曲线怎么做
1、首先,我们需要配制母液。从标准物质X中取出适量,配制出浓度为10mg/ml的母液。接着,通过逐级稀释该母液,得到一系列不同浓度的样品,例如0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、0mg/ml和0mg/ml等。按照浓度由低到高的顺序进样分析,这样做可以有效减少系统误差。
2、在进行高效液相色谱法(HPLC)的标准曲线实验时,首先需要选择合适的标准物质。以物质X为例,其标准浓度范围设定为0.1mg/mL至2mg/mL。接下来,配制样品时应取一定量的物质X,并制备成高浓度的母液,例如10mg/mL。
3、做标准曲线首先有标准物质,然后有一个曲线的浓度范围。比如说,标准物质X,浓度是0.1mg/ml-2mg/ml。配制样品的时候,取X适量,配制成浓度为10mg/ml的母液,然后逐级稀释,配制成浓度为0.1mg/ml,0.2mg/m,0.5mg/ml,0mg/ml,0mg/ml的样品,然后按照浓度由低到高的顺序进样分析。
4、标准曲线上的浓度是按法配制稀释出来的,比如你称50mg到50ml量瓶,稀释至刻度,混匀。再分别取8ml,稀释到10ml,你的标准曲线浓度分别为:0.0.0.0.0.8mg/ml,再加上母液0mg/ml。分别进样,用浓度和峰面积回归,就得到了标准曲线。
5、写色谱峰对应物质含量。右侧“校正曲线”即可实时更新校正曲线图,并标注RSD 和相关系数。“确定”保存退出。
6、数据处理的时候进入校正窗口,里面就可以做标准曲线。
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